Resumo:

O incremento da capacidade de fixação biológica de nitrogênio (FBN) pela manipulação do genoma bacteriano é uma alternativa biotecnológica para diminuição da dependência agrícola por fertilizantes nitrogenados. O presente estudo teve como objetivo padronizar condições para indução de mutagênese por métodos físicos e químicos na bactéria Azomonas sp. Colônias puras do micro-organismo alvo foram inoculadas em meio líquido de cultura (meio L), e ajustadas a D.O. de 0,5 a 680 nm após 24 horas de crescimento a 28 °C. Alíquotas de 1 mL das suspensões obtidas foram submetidas à indução de mutagênese aleatória por exposição a diferentes concentrações (0, 2, 4, 6 ,8 e 10 mM) de metilmetanosulfonato (MMS) por 30 minutos à 25º C (mutagênese química), ou por exposição em diferentes tempos (0, 5, 10, 20, 30 e 40 segundos) à radiação ultravioleta (mutagênese física). Após os tratamentos, as suspensões celulares foram diluídas e plaqueadas em meio JMV sólido para determinação do número de unidades formadoras de colônia (UFC). Os diferentes métodos de indução de mutagênese promoveram taxas de sobrevivência que variaram de 0,027% a 14,49% no método químico, e 0,02% a 3,6% no método físico. Estudos semelhantes realizados com outras espécies bacterianas indicam que taxas de sobrevivência de 5% a 10% proporcionam grande número de células mutagenizadas, favorecendo a seleção do fenótipo de interesse. A mutação química com exposição das células a 2 mM de MMS e a mutação física com exposição a radiação UV por 5 segundos promoveu 3,2% e 3,6% de taxa de sobrevivência, respectivamente, resultando nas condições ideais de mutagênese aleatória em Azomonas sp. A partir da identificação das condições ideais para mutagênese, estão sendo conduzidos ensaios para selecionar estirpes mutantes de Azomonas sp. com capacidade de FBN incrementada pela identificação de mutantes com elevada capacidade de excreção de amônio(NH4+) em meio de cultivo livre de fontes de nitrogênio.