OTIMIZAÇÃO DA PURIFICAÇÃO DO INIBIDOR DE PROTEASE DE CHENOPODIUM QUINOA COM AQUECIMENTO

OTIMIZAÇÃO DA PURIFICAÇÃO DO INIBIDOR DE PROTEASE DE CHENOPODIUM QUINOA COM AQUECIMENTO

Cipriano, N. M. Jr.; Tonelli, F.C. P.; Gonçaves, D.B.; Silva, J.A.; Granjeiro, P.A.

Resumo:

Os inibidores de proteases são uma classe de proteínas envolvidas em muitos processos fisiológicos celulares. Portanto, um desequilíbrio no balanço de proteases e seus inibidores caracterizam muitos processos patológicos humanos, como o câncer e a inflamação. Sendo seu estudo alvo para pesquisas de novos fármacos. Chenopodium quinoa, pseudoceral nativo dos Andes, apresenta sementes ricas em proteínas e seu consumo tem aumentado em países em desenvolvimento. Relatos na literatura demonstram no mínimo 3 passos cromatográficos necessários para a sua completa purificação. Estudos de estabilidade demonstram que os inibidores de proteases frequentemente mantém atividade em altas temperaturas. O objetivo desse trabalho foi desenvolver um protocolo mais econômico e eficaz para purificação de inibidores de protease, utilizando o aquecimento a 100oC por 5min. O sobrenadante do extrato bruto de C. quinoa foi testado quanto a sua estabilidade térmica em diferentes temperaturas de 37 à 100°C por 5min e não apresentou perda de atividade antitríptica na temperatura de 90ºC. Amostras de extrato bruto pré-aquecidas em 90ºC e aplicadas em coluna de cromatografia de exclusão molecular do tipo Sephadex G50 apresentou cromatograma com menor intensidade de picos proteicos. Em seguida, o pool de proteínas com atividade antitríptica foi centrifugado e o sobrenadante submetido à Eletroforese SDS-PAGE nas condições desnaturantes e confirmaram menor teor de proteínas contaminantes. O resultado da aplicação na coluna G50 após o aquecimento à 90ºC indicou que grande parte das proteínas contaminantes foram eliminadas no aquecimento por não serem termoestáveis. Os resultados obtidos permitiram a formulação de um novo protocolo de purificação, acentuadamente mais eficiente e diminuindo os custos do processo.

Os inibidores de proteases são uma classe de proteínas envolvidas em muitos processos fisiológicos celulares. Portanto, um desequilíbrio no balanço de proteases e seus inibidores caracterizam muitos processos patológicos humanos, como o câncer e a inflamação. Sendo seu estudo alvo para pesquisas de novos fármacos. Chenopodium quinoa, pseudoceral nativo dos Andes, apresenta sementes ricas em proteínas e seu consumo tem aumentado em países em desenvolvimento. Relatos na literatura demonstram no mínimo 3 passos cromatográficos necessários para a sua completa purificação. Estudos de estabilidade demonstram que os inibidores de proteases frequentemente mantém atividade em altas temperaturas. O objetivo desse trabalho foi desenvolver um protocolo mais econômico e eficaz para purificação de inibidores de protease, utilizando o aquecimento a 100oC por 5min. O sobrenadante do extrato bruto de C. quinoa foi testado quanto a sua estabilidade térmica em diferentes temperaturas de 37 à 100°C por 5min e não apresentou perda de atividade antitríptica na temperatura de 90ºC. Amostras de extrato bruto pré-aquecidas em 90ºC e aplicadas em coluna de cromatografia de exclusão molecular do tipo Sephadex G50 apresentou cromatograma com menor intensidade de picos proteicos. Em seguida, o pool de proteínas com atividade antitríptica foi centrifugado e o sobrenadante submetido à Eletroforese SDS-PAGE nas condições desnaturantes e confirmaram menor teor de proteínas contaminantes. O resultado da aplicação na coluna G50 após o aquecimento à 90ºC indicou que grande parte das proteínas contaminantes foram eliminadas no aquecimento por não serem termoestáveis. Os resultados obtidos permitiram a formulação de um novo protocolo de purificação, acentuadamente mais eficiente e diminuindo os custos do processo.

Palavras-chave:

DOI: 10.5151/biochem-jaibqi-0016

Como citar:

Cipriano, N. M. Jr.; Tonelli, F.C. P.; Gonçaves, D.B.; Silva, J.A.; Granjeiro, P.A.; "OTIMIZAÇÃO DA PURIFICAÇÃO DO INIBIDOR DE PROTEASE DE CHENOPODIUM QUINOA COM AQUECIMENTO", p-9-10. In: Anais da V Jornada Acadêmica Internacional de Bioquímica [= Blucher Biochemistry Proceedings, v.1, n.1]. São Paulo: Blucher, 2015.
ISSN 23595043, DOI 10.5151/biochem-jaibqi-0016