COMPARAÇÃO DE MÉTODOS DE EXTRAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DA ENZIMA TIROSINASE DE AGARICUS BISPORUS

COMPARAÇÃO DE MÉTODOS DE EXTRAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DA ENZIMA TIROSINASE DE AGARICUS BISPORUS

SANTOS, V. P. S dos; MENDONÇA, C.; GUTARRA, M. L. E.; TORRES, A. G.; PEREIRA, K. S.; SALGADO, A. M.; PEREIRA, P. R.

Artigo:

Visando a obtenção da tirosinase a partir do macrofungo Agaricus bisporus, foram testados os métodos de extração de rompimento celular: químico e físico combinados (permeabilização celular empregando o solventes acetona e álcool etílico e congelamento e descongelamento utilizando refrigerador doméstico) e físico (congelamento/descongelamento com emprego de nitrogênio líquido). Os extratos foram caracterizados quanto à atividade enzimática, teor de proteínas e, então, submetidos a precipitação sequencial com sulfato de amônio nos intervalos de saturação de 0-20%, 20-40%, 40-60%, 60-80% e de 80-100%. Os precipitados dialisados foram caracterizados por eletroforese em gel de poliacrilamida. Foram determinadas as condições ótimas de temperatura, pH e concentração de substrato da enzima e a estabilidade de armazenamento. A permeabilização celular com acetona se mostrou o método mais eficiente de extração. A melhor faixa de precipitação com maior recuperação da atividade enzimática foi de 40-60%. A enzima apresentou melhor desempenho nas faixas de temperatura de 25-35°C e pH 6-8. A tirosinase dos extratos bruto e precipitados apresentou massa molecular de aproximadamente 125 kDa.

Visando a obtenção da tirosinase a partir do macrofungo Agaricus bisporus, foram testados os métodos de extração de rompimento celular: químico e físico combinados (permeabilização celular empregando o solventes acetona e álcool etílico e congelamento e descongelamento utilizando refrigerador doméstico) e físico (congelamento/descongelamento com emprego de nitrogênio líquido). Os extratos foram caracterizados quanto à atividade enzimática, teor de proteínas e, então, submetidos a precipitação sequencial com sulfato de amônio nos intervalos de saturação de 0-20%, 20-40%, 40-60%, 60-80% e de 80-100%. Os precipitados dialisados foram caracterizados por eletroforese em gel de poliacrilamida. Foram determinadas as condições ótimas de temperatura, pH e concentração de substrato da enzima e a estabilidade de armazenamento. A permeabilização celular com acetona se mostrou o método mais eficiente de extração. A melhor faixa de precipitação com maior recuperação da atividade enzimática foi de 40-60%. A enzima apresentou melhor desempenho nas faixas de temperatura de 25-35°C e pH 6-8. A tirosinase dos extratos bruto e precipitados apresentou massa molecular de aproximadamente 125 kDa.

Palavras-chave:

DOI: 10.5151/chemeng-cobeq2014-0435-25499-174494

Referências bibliográficas

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Como citar:

SANTOS, V. P. S dos; MENDONÇA, C.; GUTARRA, M. L. E.; TORRES, A. G.; PEREIRA, K. S.; SALGADO, A. M.; Patricia Ribeiro Pereira; "COMPARAÇÃO DE MÉTODOS DE EXTRAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DA ENZIMA TIROSINASE DE AGARICUS BISPORUS", p-603-610. In: Anais do XX Congresso Brasileiro de Engenharia Química - COBEQ 2014 [= Blucher Chemical Engineering Proceedings, v.1, n.2]. São Paulo: Blucher, 2015.
ISSN 23591757, DOI 10.5151/chemeng-cobeq2014-0435-25499-174494