Clonagem da Protease 3C do Deformed Wing Virus

Clonagem da Protease 3C do Deformed Wing Virus

Oliveria, Maria Carolina Paleari Varjão de; Costa, Mariana Fonseca; Cañedo, Andrés Delgado

Resumo:

O Vírus Deformador de Asas (Deformed Wing Vírus – DWV) é um vírus de RNA simples fita com sentido positivo pertencente à família Picornaviridae que infecta abelhas verticalmente e horizontalmente, e é amplamente associado ao ácaro Varroa destructor, levando os indivíduos infectados a terem as asas deformadas entre outras características. Os vírus da família Picornaviridae possuem a protease 3C como um dos principais mecanismos de clivagem das proteínas virais, além de possuir participação na regulação das funções das células hospedeiras através da degradação proteolítica, evitando e bloqueando os mecanismos antivirais. Este trabalho teve por objetivo, realizar a clonagem molecular do fragmento de DNA correspondente a protease 3C do vírus DWV. A partir de amostras de abelhas Apis mellifera, positivas para o DWV, e utilizando-se de primers específicos para 3C, foi realizada a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Utilizando-se do vetor plasmidial pGEX 4T-1 e a técnica de eletroporação com bactérias eletrocompetentes, foi realizada a clonagem. Obteve-se sucesso na técnica de PCR amplificando-se assim a região do genoma viral onde encontra-se a protease 3C, bem como conseguiu-se realizar a clonagem desta região. Os clones foram mandados ao sequenciamento para confirmação da costura gênica entre o genoma plasmidial e a sequência da protease 3C. Posteriormente então, será realizada a extração da protease e iniciar-se-ão os experimentos para identificação das funções e dos mecanismos de ação nos vírus da superfamília de vírus Picorna-like.

O Vírus Deformador de Asas (Deformed Wing Vírus – DWV) é um vírus de RNA simples fita com sentido positivo pertencente à família Picornaviridae que infecta abelhas verticalmente e horizontalmente, e é amplamente associado ao ácaro Varroa destructor, levando os indivíduos infectados a terem as asas deformadas entre outras características. Os vírus da família Picornaviridae possuem a protease 3C como um dos principais mecanismos de clivagem das proteínas virais, além de possuir participação na regulação das funções das células hospedeiras através da degradação proteolítica, evitando e bloqueando os mecanismos antivirais. Este trabalho teve por objetivo, realizar a clonagem molecular do fragmento de DNA correspondente a protease 3C do vírus DWV. A partir de amostras de abelhas Apis mellifera, positivas para o DWV, e utilizando-se de primers específicos para 3C, foi realizada a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Utilizando-se do vetor plasmidial pGEX 4T-1 e a técnica de eletroporação com bactérias eletrocompetentes, foi realizada a clonagem. Obteve-se sucesso na técnica de PCR amplificando-se assim a região do genoma viral onde encontra-se a protease 3C, bem como conseguiu-se realizar a clonagem desta região. Os clones foram mandados ao sequenciamento para confirmação da costura gênica entre o genoma plasmidial e a sequência da protease 3C. Posteriormente então, será realizada a extração da protease e iniciar-se-ão os experimentos para identificação das funções e dos mecanismos de ação nos vírus da superfamília de vírus Picorna-like.

Palavras-chave:

DOI: 10.5151/biochem-vsimbbtec-22209

Referências bibliográficas

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Como citar:

Oliveria, Maria Carolina Paleari Varjão de; Costa, Mariana Fonseca; Cañedo, Andrés Delgado; "Clonagem da Protease 3C do Deformed Wing Virus", p-386-386. In: In Anais do V Simpósio de Bioquímica e Biotecnologia - VSIMBBTEC [=Blucher Biochemistry Proceedings].. São Paulo: Blucher, 2015.
ISSN 23595043, DOI 10.5151/biochem-vsimbbtec-22209