AVALIAÇÃO DA VIABILIDADE CELULAR E PRODUÇÃO DE POLI(3-HIDROXIBUTIRATO) DE Cupriavidus necator APÓS LIOFILIZAÇÃO UTILIZANDO LEITE DESNATADO COMO CRIOPROTETOR

AVALIAÇÃO DA VIABILIDADE CELULAR E PRODUÇÃO DE POLI(3-HIDROXIBUTIRATO) DE Cupriavidus necator APÓS LIOFILIZAÇÃO UTILIZANDO LEITE DESNATADO COMO CRIOPROTETOR

MARTINHAGO, F. M.; STEFFEN, W. F.; GUIMARÃES, T. R.; ALVES, C. B.; SCHMIDELL, W.; ARAGÃO, G. M. F. de

Artigo:

A preservação de micro-organismos por diferentes metodologias de secagem tem sido utilizada há décadas. Essas metodologias garantem o armazenamento de culturas por longos períodos de tempo, mantendo suas características fisiológicas. A liofilização é o método preferido para transporte e armazenamento de vastas coleções de cultura de micro-organismos. Este trabalho relata o crescimento e produção de P(3HB) por C. necator após a bactéria ser submetida à liofilização, utilizando leite desnatado como protetor. A cepa foi cultivada em meio mineral, incubada a 150 rpm/35 °C por 42 h, em seguida, 1 mL do caldo foi misturado a 1 mL de leite, acondicionado em tubos de vidro e liofilizados. A viabilidade celular foi determinada com plaqueamento e contagem (expressa em UFC/mL) antes e após (0, 14, 21 e 80 dias) o processo de liofilização. Para efeito comparativo do crescimento de C. necator e produção de P(3HB) após a liofilização, dois cultivos em frascos foram realizados a partir de uma cepa liofilizada (120 dias após o processo de liofilização) e outra armazenada em glicerol a -80 ºC (considerado o armazenamento “controle”), apresentando máx de 0,16 h

A preservação de micro-organismos por diferentes metodologias de secagem tem sido utilizada há décadas. Essas metodologias garantem o armazenamento de culturas por longos períodos de tempo, mantendo suas características fisiológicas. A liofilização é o método preferido para transporte e armazenamento de vastas coleções de cultura de micro-organismos. Este trabalho relata o crescimento e produção de P(3HB) por C. necator após a bactéria ser submetida à liofilização, utilizando leite desnatado como protetor. A cepa foi cultivada em meio mineral, incubada a 150 rpm/35 °C por 42 h, em seguida, 1 mL do caldo foi misturado a 1 mL de leite, acondicionado em tubos de vidro e liofilizados. A viabilidade celular foi determinada com plaqueamento e contagem (expressa em UFC/mL) antes e após (0, 14, 21 e 80 dias) o processo de liofilização. Para efeito comparativo do crescimento de C. necator e produção de P(3HB) após a liofilização, dois cultivos em frascos foram realizados a partir de uma cepa liofilizada (120 dias após o processo de liofilização) e outra armazenada em glicerol a -80 ºC (considerado o armazenamento “controle”), apresentando máx de 0,16 h

Palavras-chave:

DOI: 10.5151/chemeng-cobeq2014-1587-18539-158309

Referências bibliográficas

• [1] ABADIAS, M.; BENABARRE, A.; TEIXIDÓ, N.; USALL, J.; VIÑAS, I. Effect of freeze-drying and protectants on viability of the biocontrol yeast Candida sake. International Journal of Food Microbiology, v. 65, p. 173–182, 2001.
• [2] ARUN, A.; MURRUGAPPAN, R.; RAVINDRAN, A.D.D.; VEERAMANIKANDAN, V.; BALAJI, S.Utilization of various industrial wastes for the production of poly-beta-hydroxy butyrate Área temática: Processos Biotecnológicos 7(PHB) by Alcaligenes eutrophus. African Journal of Biotechnology., v. 5, p. 1524-1527, 2006.
• [3] BOZOGLU, T.F.; OZILGEN, M.; BAKIR, U. Survival kinetics of lactic acid starter cultures during and after freeze drying. Enzyme Microbiology Technology, v. 9, p. 531–537, 1987.
• [4] BRANDL, H. GROSS, R. A.; LENZ, R. W.; FULLER, C. Pseudomonas oleovorans as a source of poly(β-hydroxyalkanoates) for potential applications as biodegradable polyesters. Applied Environmental Microbiology, v. 54, p. 1977-1982. 1988.
• [5] CAMEOTRA, S. S. Preservation of microorganisms as deposits for patent application, Biochemical and Biophysical Research Communications, v. 353, p. 849-850, 2007.
• [6] HUBÁLEK, Z. Protectants used in the cryopreservation of microorganisms. Cryobiology, New York, v. 46, p. 205-229, 2003.
• [7] IENCZAK, J. L.; QUINES, L. K.; MELO, A. A. de; BRANDELLERO, M.; MENDES, C. R.;SCMIDELL, W.; ARAGÃO, G. M. F. High cell density strategy foir poly(3-hydroxybutyrate) production by Cupriavidus necator. Brazilian Journal of Chemical Engineering, Vol. 28, No. 04, pp. 585 - 596, October - December, 2011.
• [8] LEE, S. Y.; KIM, G. J.; CHOI, D. K.; YEON, B. K.; PARK, Y. H. Improvement of hydroxyvalerate fraction in poly(β-hydroxybutyrate-co-β-hydroxyvalerate) by a mutant strain of Alcaligenes eutrophus. Journal of Fermentation and Bioengineering, v. 81, p. 255-258, 1996.
• [9] MILLER, G. L. Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugars. Analytical Chemistry, v. 31, p. 426-428. 1959.
• [10] MIYAMOTO-SHINOHARA Y, SUKENOBE J, IMAIZUMI T, NAKAHARA T. Survival of freeze-dried bacteria. The Journal of general and applied microbiology, Tokyo, v. 54, n.1, p. 9-24, feb./ 2008.
• [11] SQUIO, C. R.; ARAGÃO, G. M. F. Estratégias de cultivo para produção dos plásticos biodegradáveis poli(3-Hidroxibutirato) e poli(3-hidroxibutirato-co-3-hidroxivalerato) por bactérias, Química Nova, v. 7, 2004.
• [12] TYMCZYSZYN, E. E.; GERBINO, E.; ILLANES, A.; GÓMES-ZAVAGLIA, A. Galacto-oligosaccharides as protective molecules in the preservation of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus. Cryobiology v. 62, p. 123–129, 2011.
• [13] WOLFE, J.; BRYANT, G. Cellular cryobiology: thermodynamic and mechanical effects. International Journal of Refrigeration, Surrey, v. 24, p. 438-450, 2001.
• [14] ZAYED, G., ROOS Y. H. Influence of trehalose and moisture content on survival of lactobacillus salivarius subjected to freeze-drying and storage. Process Biochemistry, 36, 1081 – 1086, 2004

Como citar:

MARTINHAGO, F. M.; STEFFEN, W. F.; GUIMARÃES, T. R.; ALVES, C. B.; SCHMIDELL, W.; ARAGÃO, G. M. F. de; "AVALIAÇÃO DA VIABILIDADE CELULAR E PRODUÇÃO DE POLI(3-HIDROXIBUTIRATO) DE Cupriavidus necator APÓS LIOFILIZAÇÃO UTILIZANDO LEITE DESNATADO COMO CRIOPROTETOR", p-2252-2259. In: Anais do XX Congresso Brasileiro de Engenharia Química - COBEQ 2014 [= Blucher Chemical Engineering Proceedings, v.1, n.2]. São Paulo: Blucher, 2015.
ISSN 23591757, DOI 10.5151/chemeng-cobeq2014-1587-18539-158309