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O adequado fornecimento de oxigênio em um bioprocesso aeróbio é fundamental para garantir o bom desempenho de biorreatores microbiológicos, sendo a capacidade de transferência de O2 avaliada através do coeficiente volumétrico de transferência de oxigênio (kLa). Existem diversos métodos para a determinação de kLa em biorreatores, entretanto, a caracterização deste parâmetro em biorreatores não convencionais pneumáticos durante cultivos de microrganismos ainda representa um desafio. Dessa forma, neste trabalho foi proposto e avaliado um método para avaliar o kLa em biorreatores coluna de bolhas durante o cultivo de Saccharomyces cerevisiae, através de um degrau de aeração. O método proposto mostrou-se promissor para ser aplicado em biorreatores pneumáticos, uma vez que a sua utilização acarretou em valores de kLa com mesma ordem de grandeza quando comparados ao biorreator operado com água destilada.